生物大分子藥物近年來發(fā)展迅猛，特別是以抗體藥物偶聯(lián)物（Antibody drug conjugate，生物分子藥物近年來發(fā)展迅猛，特別是以抗體藥物偶聯(lián)物（Antibody drug conjugate，ADC）為代表的新型藥物正以驚人的速度崛起，成為腫瘤治療領(lǐng)域中一顆璀璨的新星。ADC是通過連接子將抗體與細(xì)胞毒性載藥偶聯(lián)而成的藥物分子。

精妙絕倫的設(shè)計(jì)，使ADC兼具抗體藥物精準(zhǔn)靶向性和小分子細(xì)胞毒性藥物高效殺傷的雙重優(yōu)勢，猶如一枚精準(zhǔn)制導(dǎo)的 “生物導(dǎo)彈”，在腫瘤的靶向治療中發(fā)揮著重要作用。截止目前，全球已有17款A(yù)DC藥物被批準(zhǔn)上市。其中，僅2024年就有83種新的ADC首次進(jìn)入臨床。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，全球ADC藥物市場規(guī)模已超過130億美元。

ADC作為生物治療藥物本身結(jié)構(gòu)復(fù)雜，且具有高度非均一性的特點(diǎn)，給其質(zhì)控增加了難度，對分析檢測方法提出了更加嚴(yán)苛的要求。其中，藥物抗體比（Drug-to-antibody ratio, DAR）不僅直接反映靶向腫瘤細(xì)胞的載荷數(shù)量，同時影響ADC藥物的治療效果和安全性。因此，在ADC開發(fā)過程和商業(yè)化生產(chǎn)運(yùn)營中，作為關(guān)鍵質(zhì)量屬性之一的DAR的測定和監(jiān)測尤為重要。

疏水色譜（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是一種利用分析樣品的疏水性差異進(jìn)行分離的色譜模式，常用于ADC藥物的DAR評估。

為此，我們月旭科技推出了一款基于疏水作用機(jī)理的高性能蛋白分離色譜柱Advanchrom HIC-Butyl，它采用先進(jìn)的大孔硅膠微球?yàn)榛|(zhì)，結(jié)合獨(dú)特的表面鍵合技術(shù)，適用于抗體以及ADC的分離表征。

01 產(chǎn)品特點(diǎn)

● 獨(dú)特的化學(xué)設(shè)計(jì)，對抗體偶聯(lián)藥物分子（ADC）具有良好的選擇性

● 超高純大孔硅膠微球基質(zhì)，柱效高

● 非特異性吸附低，回收率高

● 耐壓及耐受性好

● 批次間一致性佳

● 使用較低的鹽組分即可獲得樣品良好的保留與分離

02 產(chǎn)品信息

03 案例分析

應(yīng)用案例1：雙抗ADC的DAR分析

色譜條件：

色譜柱：Advanchrom HIC-Butyl

規(guī)格：3 μm, 4.6 × 50 mm

流動相：

A）100 mM磷酸鈉緩沖溶液+1.0 M硫酸銨, pH 7.0

B）100 mM磷酸鈉緩沖溶液, pH 7.0/異丙醇=80/20

洗脫程序:

流速：0.5 mL/min

檢測波長：280 nm

柱溫：25 ℃

進(jìn)樣量：10 μL

樣品：ADC

圖1 雙抗ADC樣品不同DAR分布

結(jié)論：在硫酸銨體系下，具有不同DAR的ADC分子可在HIC柱上實(shí)現(xiàn)良好的保留與高效的分離。其中裸抗疏水性最弱，優(yōu)先被洗脫，偶聯(lián)小分子藥物數(shù)量越多的分子，其疏水性就越強(qiáng)，越晚洗脫。

雖然使用硫酸銨體系作為流動相在DAR的測定中有廣泛的應(yīng)用，但由于其作為非揮發(fā)性鹽，不能實(shí)現(xiàn)與MS的兼容。為此我們在也嘗試了乙酸銨（揮發(fā)性鹽）體系，在HIC柱上獲得單抗ADC藥物DAR2峰（如圖2）與利妥昔單抗峰（如圖3）的良好保留與優(yōu)異峰形，為后續(xù)DAR的MS鑒定提供可兼容的流動相體系。

應(yīng)用案例2：單抗ADC的DAR2測定

色譜條件：

色譜柱：Advanchrom HIC-Butyl

規(guī)格：3 μm, 4.6 × 50 mm

流動相：

A）1.0 M乙酸銨

B）25 mM乙酸銨/乙腈=70/30

洗脫程序:

流速：0.5 mL/min

檢測波長：280 nm

柱溫：30 ℃

進(jìn)樣量：10 μL

樣品：ADC

圖2 單抗偶聯(lián)ADC樣品DAR2

應(yīng)用案例3：完整抗體（利妥昔單抗）的測定

色譜條件同案例2

圖3 利妥昔單抗樣品

應(yīng)用案例4：標(biāo)準(zhǔn)蛋白的分離

色譜條件：

色譜柱：Advanchrom HIC-Butyl

規(guī)格：3 μm, 4.6 × 50 mm；3 μm, 4.6 × 35 mm

流動相：

A）100 mM磷酸鈉緩沖溶液+2.0 M硫酸銨, pH 7.0

B）100 mM磷酸鈉緩沖溶液, pH 7.0/乙腈=90/10

洗脫程序:

流速：1.0 mL/min

檢測波長：280 nm

柱溫：30 ℃

進(jìn)樣量：10 μL

樣品：(~1 mg/mL溶于流動相A中)

1. 核糖核酸酶A  2. 溶菌酶  3. α-胰凝乳蛋白酶原

圖4 標(biāo)準(zhǔn)蛋白的分離（對比市售HIC柱）

結(jié)論：月旭科技的兩款HIC柱均可實(shí)現(xiàn)三種標(biāo)準(zhǔn)蛋白的良好保留與分離，且峰形與塔板數(shù)均優(yōu)于某競品柱。

04 流動相推薦

● 在HIC-UV下，硫酸銨與乙酸銨體系均可嘗試以獲得更為滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

● HIC-MS下，使用乙酸銨體系。

05 質(zhì)量保證

每一根出廠的HIC-Butyl色譜柱都經(jīng)過成熟的裝柱工藝和嚴(yán)格的質(zhì)量管理體系生產(chǎn)，以確保良好的分離性能。

06 訂貨信息